De β-carboline-alkaloïden zijn een grote groep natuurlijk voorkomende en kunstmatige indoolalkaloïden met uitstekende farmacologische eigenschappen. Bovendien is van deze alkaloïden ook gemeld dat ze efficiënte makelaars zijn voor het bestrijden van veel plagen en plantpathogene nematoden. Onderzoek naar deze potentiële insectendodende onderdelen is echter schaars.
De eerdere ontdekking dat deze bioactieve verbindingen geprogrammeerd celverlies van het leven in de meeste kankercelstammen kunnen induceren, leverde een geheel nieuwe perceptie op voor de verkenning van hun toxicologische mechanismen op insecten. Binnen het huidige onderzoek werd de cytotoxiciteit van 5 pure harmala-alkaloïden gemeten en de autofagie-inducerende impact werd bevestigd in de Spodoptera frugiperda Sf9-gekweekte cellijn.
De resultaten toonden aan dat deze alkaloïden de proliferatie van Sf9-cellen remden in een dosis- en tijdsafhankelijke methode, en de onverzadigde β-carboline-alkaloïden, harmine en harmol, vertoonden een sterkere autofagie-inductie-oefening, voornamelijk gebaseerd op monodansylcadaverine en LysoTracker Crimson-kleuring . Veel autofagie-gerelateerde genen zijn verhoogd na -carbolines-remedie op de RNA-graad, en het werd bovendien bevestigd dat de eiwitexpressie van Sf-Atg8 zich uitstrekte na remedie.
Evenals de eerste autofagische signaalroute, de PI3K/Akt/mTOR-route, werd in de loop van het proces gewijzigd. Bovendien zijn er experimenten uitgevoerd met bepaalde remmers en activatoren om de impact van β-carbolines op deze route te verifiëren. De uitkomsten stuurden aan dat de PI3K/Akt/mTOR-route voornamelijk door harmine geïnduceerde autofagie in insectencellen reguleerde, en deze ontdekking zou ongetwijfeld kunnen profiteren van de toepassing van die veelbelovende bio-activiteitsdelen.
-Curcumine geïnduceerde autofagie en nucleophagy in Spodoptera frugiperda Sf9 insectencellen cellen gebeurt door middel van PI3K / AKT / TOR trajecten.
Verbindingen van vegetatie of microben zijn essentiële bronnen voor gloednieuwe pure pesticiden tegen allerlei soorten ongedierte. De toenemende aandacht voor de positie van autofagie (levensverlies van cellen van soort II) bij de regulering van de toxicologie van insecten heeft onderzoekers ertoe aangezet onderzoek te doen naar routes voor het verlies van levens van autofagische cellen.
Ons eerdere onderzoek toonde aan dat de cytotoxische impact van curcumine in Spodoptera frugiperda- cellen wordt gereguleerd door autofagie. Desalniettemin waren de signaalroutes en moleculaire mechanismen nog niet vastgesteld. Het huidige onderzoek verheldert de remming van curcumine van overlevingssignalering door de activering van PI3K/AKT/TOR- routes te blokkeren om autofagie in S. frugiperda-cellen te induceren.
Het gevolg toont aan dat nucleofagie verband houdt met celverlies na de curcumine-remedie. Na de curcumine-remedie was de Atg8/LC3-immunokleuring in elke kern en cytoplasma opmerkelijk verhoogd. Bijkomend werd de mate van expressie van boodschapper- RNA van Atg8- en Atgl-genenregulatie door curcumine onderzocht met behulp van kwantitatieve reverse transcriptie-polymeraseketenrespons, en het gevolg vertoonde een verhoogde mate van expressie na curcumine-remedie in een tijdsafhankelijke methode.
Ons huidige onderzoek biedt nieuwe inzichten in de autofagie die optreedt via PI3K/AKT/TOR-routes in S. frugiperda Sf9-insectencellen, geïnduceerd door curcumine. Samengevat, presenteren onze resultaten voor de eerste keer dat curcumine nucleofagie induceerde in de lepidopteron-insectencellijn.
Radioactiviteit Sf9 insectencellen cellen gemakkelijk doorstaan een intrinsieke wijze van apoptose in respons op histon deacetylase (HDAC) remmen.
Insectencelstammen zijn gebruikt als een essentieel groter eukaryotisch mannequin-systeem om stressreacties en celverlies-van-levensmechanismen te ontcijferen. Lepidoptera Sf9-cellen (afkomstig van de eierstokken van Spodoptera frugiperda) vertonen bijna 100 keer grotere weerstand tegen ioniserende straling in tegenstelling tot zoogdiercellen, wat gedeeltelijk wordt bijgedragen door een ongewoon overmatige HDAC-oefening.
Desalniettemin moet hun reactie op HDAC-remming worden geëvalueerd. Binnen het huidige onderzoek zijn de gevolgen van HDAC-remmer (NaBt) op Sf9 mobiele/nucleaire morfologie, celcyclusontwikkeling, DNA-beschadiging/herstel, redox-stand en mitochondriale verstoringen geëvalueerd.
NaBt-geïnduceerde apoptose was duidelijk na 18 uur in Sf9-cellen met een focus van 2 mM, voornamelijk via mitochondriale inductie van oxidatieve stress en daaropvolgende DNA-beschadiging. Evaluatie van de celcyclus onthulde uiterlijk vanaf 12 uur en DNA-fragmentatie na 18 uur. De eerste paar uur van de behandeling leidden tot een belangrijk verlies van MMP via oxidatie van het mitochondriale interne membraaneiwit, dwz cardiolipine.
Door HDAC-remming gemedieerde apoptose was gerelateerd aan een verhoogde Bax / Bcl2-ratio, mitochondriale cytochroom-c-lancering en caspase-Three-activering. Het onderzoek leidt dus af dat Sf9-cellen, die mogelijk te maken krijgen met zeer hoge stralingsdoses, vrij gevoelig zijn voor de stijging binnen de chromatine-acetyleringsbereiken.
Bovendien maakte HDAC-remming Sf9-cellen extra gevoelig voor door straling geïnduceerd DNA-letsel, wat onze laatste ontdekking bevestigt dat de compactheid van chromatine aanzienlijk bijdraagt aan hun radioresistentie. Vervolgens toont het onderzoek de bekendheid aan van de heersende DNA/chromatine-beschermende mechanismen in Lepidoptera-insectencellen.
De α1,6-fucosyltransferase-gen (fut8) van Sf9 Lepidoptera insecten cel lijn: inzichten in fut8 evolutie.
De kern alfa1,6-fucosyltransferase (FUT8) katalyseert de omschakeling van een fucosylgroep van GDP-fucose naar de binnenste asparaginegebonden N-acetylglucosaminerest van glycoproteïnen. Bij zoogdieren heeft deze glycosylering een essentiële werking in veel basale organische processen en hoewel er geen belangrijke positie is aangetoond, zijn bij alle dieren de FUT8-aminozuur (aa)-sequentie en FUT8-oefening zeer goed geconserveerd in het hele dierenrijk.
We hebben nu het cDNA en het hele gen dat codeert voor de FUT8 in de Sf9 (Spodoptera frugiperda) lepidoptera-cellijn gekloond. Zoals in de meeste dierlijke genomen, is fut8 een gen met een enkele kopie dat is georganiseerd in talrijke exons. Het open bestuderende lichaam herbergt 12 exons, een kenmerk dat lijkt te worden gedeeld door alle lepidoptera fut8-genen. We hebben ervoor gekozen om de genconstructie te beoordelen als een optie om de evolutionaire relaties van de fut8-genen in metazoën te karakteriseren.
Evaluatie van de intron-exon-groep in 56 fut8-orthologen stelde ons in staat een mannequin voor fut8-evolutie in metazoans voor te stellen. De aanwezigheid van een extreem variabele variëteit aan exons in metazoan fut8-genen suggereert een deftig evolutionair historisch verleden met veel intron-verwerving en -verlies, met name bij geleedpotigen, maar niet in chordata.
Bovendien, ongeacht de overmatige conservering van lepidoptera FUT8-sequenties in gewervelde dieren en hymenoptera, is de exon-intron-groep van hymenoptera fut8-genen orderspecifiek zonder gedeelde exons. Dit kenmerk betekent dat de opgemerkte intronverliezen en goede punten ook kunnen worden gekoppeld aan evolutionaire verbeteringen, vergelijkbaar met het uiterlijk van recente bestellingen.
Expressie van recombinant TAT Oct4, Sox2, Lin28 en Nanog eiwitten van baculovirus-geïnfecteerde Sf9 insectencellen cellen .
Herprogrammering van somatische cellen heeft monumentale nieuwsgierigheid gegenereerd, na het primaire rapport van het tijdperk van geïnduceerde pluripotente stamcellen (iPSC’s) van muizenfibroblasten, maar het is onwaarschijnlijk dat de integratie van virale transgenen in het genoom wordt geaccepteerd. Gezien deze veiligheidsproblemen werd een techniek ontwikkeld voor virusvrije transiënte genexpressie van aan suspensie aangepaste Sf9-insectencellen.
Hier brachten we transactivator van transcriptie (TAT)-gefuseerde eiwitten, Sox2, Oct4, Lin28 en Nanog tot expressie in Sf9-cellen met behulp van het baculovirus-expressievectorsysteem (BEVS). De molecuulgewichten van de TAT-Sox2-, TAT-Oct4-, TAT-Lin28- en TAT-Nanog-fusie-eiwitten waren respectievelijk 36 kD, 40 kD, 24 kD en 36 kD.
Bijkomend onderzoek wees uit dat veel van de recombinante eiwitten in de kernen van de Sf9-insectencellen bleven en daardoor niet beschikbaar waren voor zuivering en mobiele herprogrammering. Zodra dit nadeel is opgelost, lijkt het mogelijk dat eiwit dat tot expressie wordt gebracht uit met baculovirus geïnfecteerde Sf9-insectencellen de selectiemethode zou zijn voor mobiele herprogrammering.
